质粒拯救-质粒拯救法原理

摘要： 本文目录一览：1、质粒拯救的基本概念2、限制性内切酶介导的基因整合技术是什么...

本文目录一览：

• 1、质粒拯救的基本概念
• 2、限制性内切酶介导的基因整合技术是什么
• 3、限制酶介导整合转化
• 4、得到未知DNA的全长的方法有哪些

质粒拯救的基本概念

1、如果得到的只是部分片段，使用5或3RACE也可得到全部序列质粒拯救由Perucho在1980年首创，并用该法克隆鸡胸腺苷激酶基因。

2、虽然流感病毒拯救系统在不断完善提高，但使用RNA聚合酶I系统合成vRNA的基本概念仍然相同。 目前，流感病毒的重新合成主要通过用8-12个质粒共转染细胞来实现。其中，8质粒系统拯救甲型流感病毒最为广泛。

限制性内切酶介导的基因整合技术是什么

原理是将两种DNA分子通过限制性内切酶和连接酶拼接到一起发挥作用。

求文件： 高中生物选修3DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶（简称限制酶）：用于切割载体和目的基因，有专一性，只可形成一种粘性末端。

他们用限制性内切酶把两份不同的DNA切开，再用DNA连接酶把它们粘合在一起，从而有可能实现人为支配下的基因重新组合。这个发现毫不含糊地得到了证实。但是有了限制性内切酶和DNA连接酶，还需要有运载工具。

重组DNA技术来源于两个方面的基础理论研究——限制性核酸内切酶（简称限制酶）和基因载体（简称载体）。

在基因工程技术中最常用的工具酶是限制性核酸内切酶。充当克隆载体的分子有质粒、噬菌体和病毒。基因工程技术基本过程。

限制酶介导整合转化

1、转基因技术是利用现代生物技术，将人们期望的目标基因，经过人工分离、重组后，导入并整合到生物体的基因组中，从而改善生物原有的性状或赋予其新的优良性状。

2、限制酶的生物学功能在于降解外面侵入的DNA而不降解自身细胞中的DNA，因自身DNA的酶切位点经修饰酶的甲基化修饰而受到保护。限制酶较为稳定，常用的约100多种并已转化为商品。

3、则转化效率便较少受细菌的亲缘关系的影响。转化效率：同一种细菌也可以由于基因型的改变而改变转化效率。细菌的限制性核酸内切酶能够分解外来的DNA，所以如果用限制酶失活的突变型菌株作为转化受体时可以提高转化效率。

4、RNA在真菌中起着重要的功能，例如转录和翻译真菌基因，参与蛋白质合成等。RNA的结构与DNA有所不同，通常是单链的。RNA能够将DNA上的遗传信息转化为蛋白质。真菌的遗传物质决定了真菌的性状和特性。

5、同源重组 同源重组（Homologous recombination）是最早用来编辑细胞基因组的技术方法。同源重组是在DNA的两条相似（同源）链之间遗传信息的交换（重组）。核酸酶 基因编辑的关键是在基因组内特定位点创建DSB。

6、生物转化是指生物体内或由生物体介导的一系列化学反应，将一种物质转化为另一种物质的过程。这些化学反应通常由生物体内的酶催化，并在特定的生理条件下进行。

得到未知DNA的全长的方法有哪些

1、用已知的基因保守序列，设计引物试试；一般来说相同物种相同基因的相似性还是比较高的。当然，可以适当调节扩增程序，比如降低退火温度，这时就是引物配对差点儿，还是可以扩增出来的，可以低到30°C。

2、DNA测序主要有两种方法：化学法和酶法 主要步骤有：一端标记，碱基特异剪切。

3、跑一下琼脂糖凝胶电泳。检验一下是否提到DNA。然后用PCR进行扩增，这里你要查询一下你所需要的引物。在一些文献里会有你所需要的引物，如果没有就需要自己设计引物。扩增完再跑一下胶，看扩增的情况。

4、如果有条件，还是应该RACE，这是得到全长最正统的办法。知道几十bp应该够用了。另外我奇怪的是，NCBI上没有你需要的蛋白的mRNA序列吗？猪是Sus scrofa，不妨再找找。既然小鼠和人里面都有，猪里面应该也有。