大肠杆菌质粒-大肠杆菌质粒dna的提取三种溶液的作用

摘要： 本文目录一览：1、如何提高大肠杆菌质粒产量?2、...

本文目录一览：

• 1、如何提高大肠杆菌质粒产量?
• 2、大肠杆菌的质粒电泳图有那几条带?分别多少bp
• 3、为什么发酵的大肠杆菌提取质粒时难裂解

如何提高大肠杆菌质粒产量?

1、根据双领生物提供的信息，您可以考虑以下方法：通过PCR扩增目标DN段，并将其克隆到质粒载体中。利用限制性内切酶对质粒进行线性化，然后将目标DN段连接到线性化的质粒上。

2、和菌的生长状况有关，提取时的温度有关要低温，还需要加溶液，操作的时候要温和。对数期菌的 生长状况和数量最佳，有利于提取质粒。

3、首先，质粒的提取可分为质粒小提、质粒中提、质粒大提。目前大多数实验室都选用试剂盒进行提取，可以根据实验的不同需求，选择相应的试剂盒。

4、提高代谢产物，往往要看代谢产物怎么得到。有点像放水一样，怎么分流而已。挖大自身渠道可以提高产量，抑制旁路代谢也可提高产量。如代谢控制发酵等等。而分流的关键在于这个过程中的酶，及酶的活性表达。

5、空质粒可以提高细胞密度，从而提高质粒产量。空质粒细胞可以灵活快速运转。空质粒是指MCS（多克隆位点）里没有插入任何外源片段的质粒。

大肠杆菌的质粒电泳图有那几条带?分别多少bp

1、线性质粒（Linear Plasmids）：线性质粒是已解旋的，通常比超级融合质粒迁移速度稍慢。它们在电泳图上显示为较大的带，大小也会因质粒不同而异。

2、条。跑最快：超螺旋；中间：线性；最后：单开环。用碱法抽提的，经常只有两条。缺中间这条。

3、不过并不是每次提取的质粒都有三条带，两条带的情况也很多见，如你的空质粒。

4、正常质粒是闭合的双链DNA。在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时的分离率不同，分离速度不同，分成三带。闭环（超螺旋），开环，线形的螺旋率依次降低。

为什么发酵的大肠杆菌提取质粒时难裂解

1、杂菌污染。这种情况一般可能性最大，可能在你前面的步骤中引入杂菌，后面扩大培养时杂菌达到一定数量，耗氧和耗养增加。解决办法：用具杀菌。发酵罐条件设置不适合。

2、菌群体积，碱裂解液的pH值等。菌群体积：菌量越多，则质粒的提取量就越多。碱裂解液的pH值：碱性过强会影响DNA的纯度，而过弱则会影响碱裂解效果。pH值在12左右，效果较好。

3、你溶液二加得不够，菌体量太多，裂解不开。可以多加点，当然，溶液三也要成比例地增加。然后你检查下溶液二是否还能用，溶液二的主要作用物是NaOH和SDS，NaOH主要用来裂解，容易变质，还有SDS，溶液三形成沉淀主要是SDS的原因。

4、这可能是由于质粒的起始子序列或***特异序列的问题。可以尝试使用其他质粒提取方法或者使用高***效率的质粒。 细菌培养问题：细菌培养条件对农杆提取质粒的成功与否也有很大影响。

5、首先检查质粒赋予大肠杆菌的标记（如抗性）是否存在。如果还存在说明质粒还在，未丢失，是你提取方法有问题。若连标记（抗性）都不在了，那么肯定质粒不在了，连提取都不要，肯定提不到质粒DNA的了。

6、跟SDS一样，裂解细胞壁释放质粒用的。不过不加也没什么问题，NaOH与SDS足够将大肠杆菌细胞壁裂解开。